1. Tecniche di colorazione:
* Simple colorazione: Usando un singolo colorante per colorare l'intero organismo, evidenziando la sua forma e dimensioni complessive.
* colorazione differenziale: Utilizzando coloranti multipli con affinità diverse a diverse strutture cellulari, consentendo la visualizzazione di componenti specifici come le pareti cellulari di batteri (colorazione Gram) o spore batteriche.
* colorazione fluorescente: Usando coloranti fluorescenti che si legano a molecole specifiche all'interno dell'organismo, consentendo la visualizzazione di strutture specifiche sotto la luce UV.
2. Tipi di microscopi:
* Microscopi ottici: Usa la luce visibile per illuminare il campione, fornendo un'immagine della struttura generale.
* Microscopi a contrasto di fase: Migliorare il contrasto nei campioni non macchiati sfruttando le differenze nei cambiamenti di fase della luce, evidenziando le strutture interne.
* Microscopi a fluorescenza: Eccita i coloranti fluorescenti nel campione usando specifiche lunghezze d'onda della luce, consentendo la visualizzazione di strutture mirate.
* Microscopi confocali: Usa i laser per illuminare piani specifici all'interno del campione, creando immagini 3D dettagliate dell'organismo.
* Microscopi elettronici: Usa un raggio di elettroni per illuminare il campione, fornendo immagini ad alta risoluzione di dettagli estremamente fini.
3. Preparazione del campione:
* FIXATION: Utilizzo di sostanze chimiche per preservare la struttura del campione e prevenire il degrado.
* Incorporamento: Posizionare il campione in un mezzo di supporto come cera o resina per consentire un taglio sottile.
* Sezione: Tagliare il campione incorporato a fette sottili usando un microtomo.
* Montaggio: Posizionare le fette su uno scivolo di vetro con una vetrina per la visualizzazione.
4. Altre tecniche:
* Immunofluorescenza: Usando anticorpi fluorescenti per etichettare proteine o antigeni specifici all'interno dell'organismo.
* Ibridazione in situ: Usando sonde marcate per rilevare sequenze di acido nucleico specifiche all'interno dell'organismo.
* Imaging a cellule live: Osservando gli organismi viventi in tempo reale, fornendo approfondimenti sui loro processi dinamici.
La scelta della tecnica giusta dipende dai seguenti fattori:
* le dimensioni e la complessità dell'organismo.
* Le strutture specifiche che vuoi visualizzare.
* Il livello di dettaglio richiesto.
* La disponibilità di risorse e competenze.
Combinando le tecniche di colorazione appropriate, i tipi di microscopia e i metodi di preparazione dei campioni, è possibile distinguere e analizzare efficacemente le parti intricate di un organismo.
