Di Marcia Spear
Aggiornato il 24 marzo 2022
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La colorazione di Gram è una tecnica microbiologica fondamentale che distingue i batteri Gram-positivi da quelli Gram-negativi in base alla struttura della parete cellulare e al colore risultante. L'alcol acetonico svolge un ruolo fondamentale come agente decolorante, consentendo la differenziazione del colore finale per rivelare l'identità batterica.
Dopo aver preparato uno striscio batterico, si applica il cristalvioletto per 30 secondi. In questa fase, sia le cellule Gram-positive che quelle Gram-negative appaiono uniformemente viola. Un breve lavaggio con acqua rimuove il colorante in eccesso, sebbene una parte di cristalvioletto rimanga legata agli spessi strati di peptidoglicano delle cellule Gram-positive.
Lo iodio viene aggiunto per un minuto, funzionando come un mordente che si lega al cristalvioletto e forma un complesso insolubile cristalvioletto-iodio. Questo complesso aderisce fortemente al robusto peptidoglicano dei batteri Gram-positivi, fissando la colorazione primaria senza un successivo risciacquo con acqua.
L'acetone o l'alcol etilico vengono utilizzati per 10-20 secondi per rimuovere il complesso cristalvioletto-iodio dalle cellule Gram-negative. L'alcol dissolve la membrana lipidica esterna, consentendo al colorante di fuoriuscire dallo strato più sottile di peptidoglicano. Dopo che il dilavamento è incolore, un risciacquo con acqua interrompe l'azione decolorante. Le cellule Gram-positive mantengono la colorazione viola, mentre le cellule Gram-negative diventano incolori.
La safranina viene applicata per circa un minuto per fornire contrasto, colorando di rosa i batteri Gram-negativi, ora incolori. La maschera cristalvioletto più scura garantisce che le cellule Gram-positive rimangano viola. Un ultimo risciacquo con acqua rimuove la safranina in eccesso.
