1. Scegli la giusta tecnica di cromatografia:
* Cromatografia a strato sottile (TLC): Questa è una tecnica semplice e versatile. Separa i componenti in base alla loro affinità per la fase stazionaria (di solito una piastra di gel di silice) e la fase mobile (un solvente). Sebbene non vedrai i colori, puoi visualizzare i componenti separati usando:
* Luce UV: Molte sostanze assorbono la luce UV, rendendole visibili sotto una lampada UV.
* Reagenti di visualizzazione: I reagenti chimici specifici possono reagire con i composti separati per produrre macchie colorate.
* Vapore di iodio: Il vapore di iodio può reagire con molti composti organici per formare macchie marroni.
* gascromatografia (GC): Questa tecnica separa sostanze volatili in base ai loro punti di ebollizione. È in genere accoppiato con un rivelatore in grado di identificare e quantificare i componenti, come A:
* Rilevatore di ionizzazione della fiamma (FID): Questo è sensibile ai composti organici.
* Spettrometro di massa (MS): Ciò fornisce informazioni strutturali dettagliate sui composti separati.
* Cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC): Questa potente tecnica separa i componenti in base alla loro polarità e interazioni con la fase stazionaria. Viene spesso usato per analizzare miscele complesse ed è generalmente accoppiato con un rilevatore come:
* Rivelatore UV/VIS: Rileva composti che assorbono la luce UV o visibile.
* Rilevatore di indici di rifrazione: Rileva i cambiamenti nell'indice di rifrazione del solvente eluito causato dalla presenza di un composto.
2. Visualizzazione e identificazione:
* Luce UV: Molti composti, anche quelli incolori, assorbono la luce UV. Usando una lampada UV, puoi vedere le macchie dei composti separati su una piastra TLC.
* Reagenti di visualizzazione: Diversi reagenti reagiscono con gruppi funzionali specifici nei composti per creare punti colorati su una piastra TLC.
* Rilevatori: GC e HPLC usano i rilevatori per segnalare la presenza di componenti mentre elutano dalla colonna.
3. Analisi quantitativa:
* Standard di calibrazione: Eseguindo quantità note della sostanza insieme al campione, è possibile utilizzare i risultati della cromatografia per determinare la concentrazione della sostanza nel campione.
* Area sotto il picco: In GC e HPLC, l'area sotto il picco è proporzionale alla quantità della sostanza.
Esempio:
Immagina di voler analizzare una miscela di zuccheri (glucosio, fruttosio e saccarosio). Questi zuccheri sono incolori, ma puoi separarli usando TLC o HPLC.
* tlc: Dopo aver eseguito la miscela, è possibile utilizzare un reagente come anilina-phtalato (che reagisce con gli zuccheri per produrre macchie colorate) per visualizzare i componenti separati.
* HPLC: Usando un rilevatore UV/Vis, è possibile vedere i picchi corrispondenti a ciascun zucchero mentre eluiranno dalla colonna. Confrontando le aree di picco con gli standard noti, è possibile determinare le quantità relative di ciascun zucchero nella miscela.
Ricorda, la scelta della giusta tecnica di cromatografia e il metodo di visualizzazione dipende dalla sostanza specifica che stai analizzando.
