Uno spettrofotometro viene utilizzato per determinare la concentrazione di determinati composti, come le proteine, in una soluzione. In generale, una luce risplende attraverso una cuvetta riempita con un campione. Viene misurata la quantità di luce che viene assorbita dal campione. Poiché i composti assorbono la luce in diversi intervalli spettrali, per l'analisi deve essere impostata la giusta lunghezza d'onda. Esistono numerosi modi per calcolare la concentrazione di campioni sconosciuti mediante spettrofotometria, tuttavia l'utilizzo di standard di riferimento offre la massima accuratezza. Inoltre, gli standard indicano anche se lo spettrofotometro non funziona correttamente o altri problemi con l'analisi.

Calcolo tramite equazioni a linea retta

Analizzare gli standard di riferimento all'inizio dell'analisi. Gli standard sono concentrazioni note e vengono utilizzati per calibrare le apparecchiature e verificare l'accuratezza. Tutti i campioni dovrebbero rientrare nell'intervallo operativo degli standard. In caso contrario, sarà necessario diluire i campioni o aumentare la concentrazione degli standard.

Creare un grafico a dispersione o grafico a linee con le letture di concentrazione e assorbenza standard. La concentrazione sarà sull'asse y, l'assorbenza sull'asse x. Ad esempio, gli standard sono 1 ppm, 2,5 ppm e 5 ppm. L'assorbenza fornita era 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 e 5 ppm = 0,75.

Formatta la linea di tendenza per visualizzare un'equazione sul grafico. L'equazione mostrerà la formula y = mx + b. Ad esempio, utilizzando gli standard nel passaggio 2, l'equazione è y = .1224x + 0.1531. La maggior parte delle linee di tendenza sono intercettate a zero, ma dipende dal metodo analitico e dal valore del R-quadrato.

Analizza campioni sconosciuti e registra letture di assorbenza.

Usa l'equazione (y = mx + b ) per determinare la concentrazione dei campioni.

Comprensione dell'equazione della retta

Sia "Y" uguale alla concentrazione. Questo è ciò che sarà risolto.

Sia "X" uguale all'assorbimento del campione. Questa è l'assorbenza misurata dallo spettrofotometro.

Consenti a "" di eguagliare la pendenza e "b" uguale all'intersezione y. Entrambi sono dati, tuttavia se la linea di tendenza è forzata da 0, allora "b" sarà 0.

Risolvi la concentrazione. Utilizzando l'esempio nel passaggio 3, sostituire "x" come una data capacità di assorbimento di 0,563. Quindi:

y = .1224 (.563) + 0.1531

y (concentrazione) = .222011

Suggerimento

Le unità della concentrazione saranno essere uguale agli standard. Ad esempio, le unità sono parti per milione (ppm) o parti per miliardo (ppb).

Gli standard di riferimento e i campioni sono facilmente contaminati.

Avviso

Leggere sempre tutte le parti di dosaggio o metodo prima di svilupparlo.