La cromatografia liquida ad alte prestazioni è una tecnica per l'analisi di laboratorio di una miscela. È un tipo efficiente di cromatografia che utilizza l'alta pressione, piuttosto che semplicemente la gravità, per spingere un campione di una miscela attraverso una colonna. Viene iniettato un campione, quindi una pompa contenente elevate quantità di pressione aiuta a spostare il campione lungo una colonna impaccata, dove viene separato in singoli componenti. Questa separazione viene quindi analizzata da un rivelatore per ottenere risultati.

Sito di iniezione

Per essere iniettato in una HPLC, un campione deve essere prima sciolto in un solvente liquido polare, preferibilmente uno con spettri HPLC noti in modo tale che i dati possano essere distinti dal campione. La soluzione liquida contenente il campione viene inserita nello strumento e inviata nella colonna. La posizione effettiva del sito di iniezione dipende dalla marca di strumenti. Nella maggior parte dei casi, il processo di iniezione è automatizzato, ma in alcuni casi un operatore di laboratorio deve iniettare il campione utilizzando un piccolo ago per siringa.

Componente della pompa

Il componente della pompa dell'unità HPLC è necessario perché fornisce la pressione che spinge il campione attraverso la colonna. La forza della pompa varia, ma una potente può produrre una pressione fino a 6.000 psi, o libbre per pollice quadrato, che viene applicata dopo l'iniezione del campione. Ciò consente al campione di passare attraverso la colonna in modo più rapido ed efficiente rispetto al caso in cui dovesse gocciolare utilizzando solo la forza di gravità.

Descrizione colonna

L'aumento della velocità di un campione passato attraverso il colonna mediante una pompa consente l'uso di un diverso tipo di colonna rispetto a quelli utilizzati nella cromatografia liquida semplice. Il materiale di imballaggio nella colonna può avere una dimensione delle particelle molto più piccola, che aumenta l'area superficiale e quindi aiuta le interazioni del campione con la colonna. La maggior parte delle colonne HPLC funziona attraverso la polarità. Il campione è disciolto in un solvente polare e la colonna è costituita da idrocarburi in gran parte non polari. Le parti polari della molecola del campione attraversano la colonna molto rapidamente perché interagiscono principalmente con il solvente, mentre i componenti non polari del campione indugiano nella colonna, formando deboli interazioni con i componenti della colonna. Pertanto, i componenti del campione escono dalla colonna in ordine dalla maggior parte polare alla maggior parte non polare.

Funzione rivelatore

I rilevatori variano anche in base al tipo di strumento HPLC utilizzato. Tuttavia, la maggior parte funziona nello stesso modo base. Una fonte di luce ultravioletta brilla sui componenti del campione separati mentre escono dalla colonna. La maggior parte dei composti organici assorbono una certa quantità di luce, così quando passano attraverso il raggio di luce applicato, un rilevatore può rilevare quanta luce viene assorbita. Il rilevatore registra anche il tempo di conservazione dei componenti in base all'ordine in cui escono dalla colonna. Questo output può quindi essere analizzato in base all'area del picco per determinare la natura esatta dei componenti del campione.