1. Esame e preparazione:
- Aprire con attenzione la confezione commerciale dei funghi, conservando eventuali informazioni sulla confezione che potrebbero fornire indizi sull'origine o la fonte dei funghi.
- Rimuovere delicatamente i funghi dalla confezione, facendo attenzione a non danneggiare le strutture delicate.
- Preparare i funghi per un esame dettagliato pulendo delicatamente qualsiasi terreno o detriti con una spazzola morbida.
2. Esame morfologico:
- Utilizzare una lente d'ingrandimento o un microscopio per osservare da vicino le caratteristiche morfologiche dei funghi, tra cui:
- Forma e dimensione del corpo fruttifero
- Presenza e colore del cappello, del gambo e delle lamelle
- Consistenza delle superfici del cappello e dello stelo
- Colore dell'impronta sporale
3. Analisi microscopica:
- Preparare vetrini microscopici di strutture importanti come la morfologia delle spore, basidi, cistidi, ife e qualsiasi altra struttura distintiva.
- Utilizzare coloranti specializzati, come il lattofenolo cotton blu o il reagente di Melzer, per migliorare componenti cellulari specifici e facilitare l'osservazione.
4. Estrazione del DNA:
- Seguendo le istruzioni del produttore, estrarre il DNA genomico da un piccolo campione di funghi utilizzando un kit di estrazione del DNA disponibile in commercio.
5. Amplificazione PCR:
- Progettare primer per regioni specifiche del DNA, come la regione dello spaziatore trascritto interno (ITS), comunemente utilizzate per l'identificazione dei funghi.
- Eseguire la reazione a catena della polimerasi (PCR) utilizzando il DNA estratto e i primer progettati.
6. Sequenziamento del DNA:
- Purificare i prodotti della PCR e inviarli al sequenziamento Sanger, che fornisce la sequenza del DNA della regione target.
7. Ricerca BLAST e analisi dei dati:
- Confrontare la sequenza di DNA ottenuta con sequenze fungine note utilizzando il database BLAST (Basic Local Alignment Search Tool).
- Analizzare le somiglianze di sequenza e qualsiasi informazione tassonomica disponibile per determinare se i funghi corrispondono a specie conosciute o se rappresentano una specie non descritta.
8. Analisi filogenetica:
- Se i funghi mostrano una divergenza significativa dalle specie conosciute, condurre un'analisi filogenetica per dedurre la sua relazione evolutiva con le altre specie descritte.
9. Descrizione tassonomica:
- Sulla base delle analisi morfologiche, microscopiche e molecolari, compilare una descrizione tassonomica dettagliata dei funghi. Ciò include:
- Nome del genere e della specie (se non descritto)
- Descrizione dettagliata delle caratteristiche morfologiche
- Caratteristiche della sequenza del DNA
- Posizione geografica e informazioni sull'habitat
- Potenziale significato ecologico
10. Pubblicazione:
- Inviare la descrizione tassonomica a una rivista scientifica o a un database pertinente, insieme a immagini e dati di supporto, per la pubblicazione formale e il riconoscimento della nuova specie.
Combinando esame morfologico, analisi microscopica, tecniche molecolari e competenze tassonomiche, è possibile identificare e descrivere rapidamente specie non descritte trovate in un pacchetto di funghi commerciale. Ciò contribuisce alla nostra comprensione della diversità fungina e fornisce preziose informazioni per studi ecologici, sforzi di conservazione e progresso della conoscenza micologica.
