Un'unità di elettroforesi in gel verticale è un dispositivo utilizzato in biologia molecolare e biochimica per separare le molecole, principalmente proteine e acidi nucleici (DNA e RNA) , in base alla loro dimensione e carica .
Ecco una rottura delle sue caratteristiche chiave:
1. Componenti:
* vassoio di casting gel: Questo contiene il gel, che è una matrice porosa che agisce come mezzo di separazione.
* Piatti di vetro: Due piastre di vetro verticali schingano il gel, creando un canale stretto per la migrazione del campione.
* Camere buffer: Questi contengono il tampone di elettroforesi, che conduce elettricità e mantiene il pH del sistema.
* Elettrodi: Una coppia di elettrodi (anodo e catodo) genera un campo elettrico che guida le molecole attraverso il gel.
* Alimentazione: Fornisce una corrente continua agli elettrodi, creando il campo elettrico per la separazione.
* Comb: Questo viene utilizzato per creare pozzi nel gel, in cui vengono caricati i campioni.
2. Principio di lavoro:
* Il gel è in genere realizzato in poliacrilammide (Pagina) o agarosio , con densità variabili per controllare le dimensioni dei pori.
* I campioni vengono caricati in pozzi nella parte superiore del gel.
* Quando viene applicato un campo elettrico, le molecole migrano attraverso il gel verso l'elettrodo con la carica opposta (positivo per molecole caricate negativamente e viceversa).
* Molecole più piccole migrano più velocemente Attraverso i pori del gel, mentre le molecole più grandi incontrano più resistenza e si muovono più lentamente.
* Ciò risulta in bande di separazione in base alle dimensioni, con le molecole più piccole nella parte inferiore e le più grandi nella parte superiore.
3. Applicazioni:
* Analisi delle proteine: Determinare la dimensione della proteina, la purezza e la presenza.
* Analisi del DNA: Sequenziamento, analisi del polimorfismo della lunghezza del frammento di restrizione (RFLP) e clonazione.
* Analisi RNA: Valutazione dell'espressione genica e studiare la struttura dell'RNA.
4. Vantaggi:
* Alta risoluzione: Fornisce una chiara separazione delle molecole con lievi differenze di dimensioni.
* Versatilità: Adatto a vari tipi di campioni e applicazioni.
* Analisi quantitativa: L'intensità della banda può essere utilizzata per misurare la quantità di ciascuna molecola.
5. Limitazioni:
* Setup complesso: Richiede un'attenta preparazione e attenzione ai dettagli.
* che richiede tempo: Il processo di elettroforesi può richiedere diverse ore.
* Capacità limitata: La dimensione del gel limita il numero di campioni che possono essere eseguiti contemporaneamente.
Nel complesso, l'unità di elettroforesi in gel verticale è uno strumento essenziale per i ricercatori in vari settori, fornendo preziose informazioni sulla composizione e sulle caratteristiche delle molecole biologiche.
