1. Conferma dell'integrazione degli inserti:
* Digestione e analisi degli enzimi di restrizione: Se la modifica genetica prevede l'inserimento di un gene specifico, il DNA dall'organismo modificato può essere digerito con enzimi di restrizione che tagliano in siti specifici all'interno del gene inserito. I frammenti risultanti possono quindi essere separati dall'elettroforesi su gel. La presenza delle dimensioni del frammento previsto conferma l'integrazione del gene.
* Amplificazione e analisi PCR: Primer specifici possono essere progettati per amplificare la sequenza genica inserita. La presenza del prodotto amplificato indica la riuscita integrazione del gene.
2. Verifica dell'espressione:
* Isolamento e analisi dell'RNA: L'RNA estratto dall'organismo modificato può essere analizzato mediante elettroforesi su gel per rilevare la presenza di mRNA corrispondente al gene inserito. Ciò conferma che il gene viene trascritto.
* Analisi Western blot: Questa tecnica può rilevare la presenza del prodotto proteico del gene inserito.
Esempio:
Immagina di aver geneticamente modificato una pianta per esprimere un gene per la resistenza agli erbicidi.
* Passaggio 1: Isoleresti il DNA dalle piante modificate e non modificate.
* Passaggio 2: Utilizzeresti enzimi di restrizione per tagliare il DNA, prendendo di mira in particolare la regione in cui è stato inserito il gene della resistenza agli erbicidi.
* Passaggio 3: Organizzeresti il DNA digerito su un apparato di elettroforesi su gel.
* Passaggio 4: Cercheresti una banda specifica nel gel corrispondente alla dimensione del gene inserito. Se la banda è presente nella pianta modificata ma assente nella pianta non modificata, conferma la riuscita integrazione del gene.
Limitazioni:
* L'elettroforesi in gel non è sempre la tecnica più sensibile. Potrebbe non rilevare piccoli cambiamenti nell'espressione genica o piccole quantità di DNA inserito.
* Può essere difficile distinguere tra diversi tipi di mutazioni o inserzioni geniche usando solo l'elettroforesi su gel.
* Mentre l'elettroforesi in gel può confermare la presenza del gene desiderato, non può confermare la sua funzionalità. Sono necessari ulteriori studi funzionali per confermare che il gene viene effettivamente espresso e funzionante correttamente.
Altre tecniche:
L'elettroforesi in gel viene spesso utilizzata in combinazione con altre tecniche come il sequenziamento, il blotting meridionale e il qPCR per fornire una valutazione più completa dell'esperimento di modifica genetica.
In conclusione, l'elettroforesi su gel è un potente strumento per analizzare il DNA e l'RNA e può essere utilizzato per valutare il successo di un esperimento di modifica genetica. Tuttavia, è fondamentale utilizzare altri metodi e tecniche per confermare i risultati e valutare pienamente il successo dell'esperimento.
