Comprensione dei componenti:
* enzima blank: Questo contiene tutto * tranne * il substrato. Il suo scopo è quello di tenere conto di qualsiasi attività di fondo o assorbanza che non è dovuta alla reazione dell'enzima-substrato. Questo potrebbe includere:
* Auto-attività enzimatica: Alcuni enzimi potrebbero avere una leggera attività anche in assenza del loro substrato specifico.
* Reazioni non enzimatiche: La soluzione tampone stessa o altri componenti nella miscela di reazione potrebbero contribuire ai cambiamenti di assorbanza.
* substrato: Questa è la molecola su cui l'enzima agisce per produrre un prodotto.
* Soluzione combinata: Ciò includerebbe sia l'enzima che il substrato.
Perché le soluzioni separate sono cruciali:
1. Misurazione accurata della reazione specifica: L'uso di spazi vuoti e substrati separati ci consente di isolare e misurare l'attività esclusivamente a causa dell'interazione dell'enzima con il suo substrato specifico. Possiamo sottrarre l'attività di sfondo misurata nel vuoto dall'attività totale misurata nella soluzione combinata.
2. Eliminare l'interferenza: Mescolare in anticipo l'enzima e il substrato potrebbe portare a:
* Formazione prematura del prodotto: L'enzima potrebbe iniziare a agire sul substrato prima dell'inizio dell'esperimento, portando a risultati imprecisi.
* Degradazione dell'enzima: L'enzima potrebbe diventare instabile o inattivo se pre-miscelato con il substrato per un lungo periodo.
3. Controllo sopra la reazione Avvia: Aggiungendo l'enzima e il substrato separatamente, otteniamo il controllo sul momento preciso inizia la reazione. Questo è essenziale per studiare la cinetica della reazione (quanto velocemente procede).
Esempio:
Immagina di misurare l'attività di un enzima che abbatte un substrato colorato. Se si combinano l'enzima e il substrato, la modifica del colore potrebbe iniziare immediatamente, rendendo difficile determinare il tasso effettivo della reazione. L'uso di uno spazio vuoto per tenere conto di eventuali colori iniziali e misurare la modifica del colore specificamente dovuta all'azione dell'enzima sul substrato fornirà risultati più accurati.
In sintesi:
L'uso di spazi vuoti e substrati enzimatici è cruciale per misurazioni accurate e affidabili di attività degli enzimi. Questo metodo garantisce che stiamo misurando solo l'attività specifica dell'enzima sul suo substrato, eliminando l'interferenza e consentendo l'inizio della reazione controllata.
