1. Lisi cellulare:
* Le cellule sono aperte, rilasciando il loro contenuto, incluso il DNA.
* Questo può essere fatto usando vari metodi, come ad esempio:
* Detersivi: Interrompere le membrane cellulari e rilasciare il contenuto.
* enzimi: Abbattere le proteine, consentendo il rilascio di DNA.
* Metodi meccanici: Come sonicazione o battito di perline, cellule fisicamente di interrompere.
2. Rimozione di detriti cellulari:
* Dopo la lisi cellulare, il lisato contiene una miscela di componenti cellulari.
* Per isolare il DNA, altri componenti come proteine e lipidi devono essere rimossi. Questo può essere ottenuto attraverso:
* Centrifugazione: La rotazione del lisato ad alta velocità separa i componenti in base alla densità. Il DNA è di solito nel surnatante.
* Digestione: Enzimi come la proteinasi K abbattono le proteine.
* salting-out: L'aggiunta di sale al lisato, che precipita le proteine ma lascia il DNA in soluzione.
3. Precipitazione del DNA:
* Il DNA viene quindi precipitato fuori dalla soluzione, rendendolo visibile. Questo viene in genere fatto usando etanolo o isopropanolo .
* Questi alcoli sono meno polari dell'acqua, causando un raggruppamento del DNA e formano un precipitato visibile.
* L'aggiunta di sale può migliorare ulteriormente le precipitazioni neutralizzando le cariche negative sulla molecola di DNA.
4. Visualizzazione:
* Il DNA precipitato viene quindi raccolto, in genere a bobalo attorno a un'asta di vetro o usando una pipetta.
* Il DNA appare come una massa bianca e fila Perché è altamente arrotolato e intrecciato.
Punti importanti:
* Il processo di isolamento e visualizzazione del DNA può essere ottimizzato in base al tipo di cella e all'applicazione prevista.
* Potrebbero essere utilizzate diverse tecniche e reagenti a seconda dei requisiti sperimentali specifici.
* La visualizzazione può anche essere migliorata usando tecniche di colorazione, come l'uso di un bromuro di colorante come l'ethidium, che si lega al DNA e lo rende fluoro sotto la luce UV.
Comprendendo il processo di precipitazione e visualizzazione del DNA, è possibile isolare e analizzare efficacemente il DNA da varie fonti.
