Il principio del dosaggio della glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) si basa sulla reazione enzimatica catalizzata dalla G6PD. Il G6PD è un enzima che svolge un ruolo cruciale nella via del pentoso fosfato, una via metabolica responsabile della generazione di NADPH, un agente riducente.
In questo test, G6PD catalizza l'ossidazione del glucosio-6-fosfato (G6P) in 6-fosfogluconato (6-PG) utilizzando NADP+ come accettore di elettroni. Durante questa reazione, il NADP+ viene ridotto a NADPH, che presenta una forte assorbanza a 340 nm. Misurando l'aumento dell'assorbanza a 340 nm nel tempo, è possibile quantificare l'attività enzimatica della G6PD.
Ecco i passaggi chiave coinvolti nel test G6PD:
1. Preparazione del campione: Viene preparato un campione contenente G6PD, come un lisato cellulare o un omogenato tissutale.
2. Miscela di reazione: La miscela di reazione include tipicamente G6P, NADP+, una soluzione tampone e il campione contenente G6PD.
3. Incubazione: La miscela di reazione viene incubata a una temperatura e a un pH specifici, consentendo il verificarsi della reazione enzimatica.
4. Misurazione spettrofotometrica: L'assorbanza della miscela di reazione viene misurata a 340 nm utilizzando uno spettrofotometro. Questa lettura dell'assorbanza corrisponde alla quantità di NADPH prodotta.
5. Calcoli: La variazione dell'assorbanza a 340 nm nel tempo viene utilizzata per calcolare l'attività enzimatica della G6PD. Questo calcolo considera il coefficiente di estinzione del NADPH e il volume della miscela di reazione.
6. Unità di attività enzimatica: L'attività della G6PD è comunemente espressa in unità per litro (U/L) o unità internazionali per litro (IU/L), dove un'unità di attività enzimatica rappresenta la quantità di enzima necessaria per produrre 1 micromole di NADPH al minuto nelle condizioni di analisi specificate .
La misurazione dell'attività della G6PD ha un significato clinico, poiché le carenze di G6PD possono portare a una condizione nota come deficit di G6PD, che causa anemia emolitica se esposto a determinati farmaci o sostanze. I test della G6PD vengono eseguiti per diagnosticare il deficit di G6PD e monitorare l'attività enzimatica negli individui affetti dalla condizione.
