1. Preparazione del campione:
- Vengono raccolti campioni di sangue o altri tessuti dall'individuo.
- I globuli bianchi vengono isolati dal campione.
- Le cellule vengono coltivate in laboratorio per stimolare la divisione cellulare.
2. Raccolta e fissazione delle cellule:
- Nello stadio appropriato della divisione cellulare (metafase), le cellule vengono raccolte e trattate con una soluzione ipotonica per gonfiarle.
- Le cellule gonfie vengono quindi fissate con un fissativo, tipicamente una miscela di sostanze chimiche come metanolo e acido acetico, per preservare le strutture cellulari.
3. Preparazione delle diapositive:
- Le cellule fissate vengono lasciate cadere su vetrini da microscopio e sparse per creare un monostrato di cromosomi.
- I vetrini vengono asciugati all'aria o riscaldati per migliorare l'adesione dei cromosomi alla superficie del vetro.
4. Colorazione:
- Per colorare i cromosomi viene utilizzata una tecnica di colorazione, come Giemsa o trypsin-Giemsa.
- Le macchie si legano a regioni specifiche dei cromosomi, consentendo l'identificazione di caratteristici modelli di bande.
5. Modelli di fasce:
- I modelli di bande sui cromosomi sono unici per ciascuna coppia di cromosomi e forniscono una rappresentazione visiva della struttura e dell'organizzazione dei cromosomi.
- Questi modelli vengono utilizzati per l'identificazione e l'analisi dei cromosomi.
6. Cariotipo:
- I cromosomi colorati sono disposti e organizzati in un formato standard in base alla loro dimensione, forma e motivi di fasciatura.
- Questa disposizione organizzata crea un cariotipo, che è essenzialmente una rappresentazione fotografica del complemento cromosomico di un individuo.
7. Analisi cromosomica:
- I cariotipi vengono esaminati al microscopio da citogenetici o altri professionisti qualificati.
- Analizzano il numero, la struttura e le eventuali anomalie dei cromosomi.
- Variazioni numeriche o strutturali specifiche (ad esempio duplicazioni, delezioni, traslocazioni) possono essere rilevate e studiate in maggiore dettaglio.
8. Marcatori genetici e FISH:
- Tecniche specializzate come l'ibridazione fluorescente in situ (FISH) possono essere utilizzate per indagare ulteriormente loci genetici specifici o identificare riarrangiamenti cromosomici.
- La FISH prevede l'utilizzo di sonde fluorescenti che si legano a specifiche sequenze di DNA, consentendo la visualizzazione di specifiche regioni cromosomiche o geni di interesse.
9. Interpretazione e reporting:
- Sulla base dell'analisi del cariotipo e delle eventuali tecniche aggiuntive utilizzate, viene generato un report citogenetico.
- Il rapporto descrive i risultati cromosomici, identifica eventuali anomalie o variazioni cromosomiche e fornisce informazioni rilevanti per la consulenza genetica, la diagnosi e la gestione delle malattie genetiche.
È importante notare che l'analisi del cariotipo è un campo specializzato e l'interpretazione delle anomalie cromosomiche richiede esperienza e conoscenza della genetica umana e della citogenetica.
