Ecco una rottura:
Cos'è?
* Gli adattatori sono piccole sequenze di DNA appositamente progettate con estremità appiccicose , che sono sporgenze corte a singolo filamento che possono legarsi a sequenze complementari.
* In genere sono lunghe 10-20 coppie di basi.
Qual è il loro scopo?
1. Unendo i frammenti di DNA con estremità incompatibili:
* A volte, i frammenti di DNA che si desidera unirti hanno diversi siti di taglio degli enzimi di restrizione, con conseguenti estremità incompatibili.
* Gli adattatori possono essere legati alle estremità di questi frammenti, fornendo estremità appiccicose compatibili che possono quindi essere unite dalla ligasi del DNA.
2. Creazione di siti di enzimi di restrizione specifici:
* Potrebbe essere necessario un sito enzimatico di restrizione specifica per la clonazione o altre manipolazioni.
* Gli adattatori possono essere progettati per includere questi siti, consentendo di creare il sito di restrizione desiderato sul frammento del DNA.
3. Aggiunta di nuove sequenze:
* Gli adattatori possono trasportare sequenze specifiche come promotori, codoni di avvio o altri elementi normativi.
* Questi possono essere aggiunti al frammento di DNA legando l'adattatore.
Come funziona:
1. Digestione di restrizione: Il frammento di interesse del DNA viene digerito con un enzima di restrizione per creare estremità appiccicose.
2. Legati dell'adattatore: L'adattatore viene legata alle estremità digerite del frammento di DNA, usando la ligasi del DNA.
3. Unendo con altri frammenti: Il frammento modificato con adattatore può quindi essere unito ad altri frammenti, per legatura o con altri metodi, per creare una molecola di DNA più ampia.
Esempio:
* Immagina di voler inserire un gene in un plasmide.
* Il gene è stato tagliato con l'enzima A, creando estremità appiccicose.
* Il plasmide è stato tagliato con l'enzima B, creando diverse estremità appiccicose.
* È possibile utilizzare un adattatore con estremità appiccicose compatibili con sia l'enzima A che l'enzima B per unirsi al gene e al plasmide.
In sintesi:
Gli adattatori sono strumenti versatili nella tecnologia del DNA ricombinante che facilitano l'adesione ai frammenti di DNA, la creazione di siti enzimi di restrizione specifici e l'aggiunta di nuove sequenze alle molecole di DNA. Svolgono un ruolo cruciale nella manipolazione del DNA per varie applicazioni, tra cui clonazione genica, terapia genica e diagnostica.
