L'elettroforesi di confine libera o mobile è un tipo di tecnica di elettroforesi che si basa sul movimento di un limite nitido tra una soluzione contenente l'analita (sostanza di interesse) e una soluzione tampone . Questa tecnica è stata sviluppata da Arne Tiselius negli anni '30 e gli è valso il premio Nobel in chimica nel 1948 .
Ecco come funziona:
1. Preparazione: Una soluzione contenente l'analita è stratificata sopra una soluzione tampone in un tubo di vetro verticale. Le due soluzioni hanno diversi indici di rifrazione, creando un confine visibile.
2. Elettroforesi: Un campo elettrico viene applicato attraverso il tubo. Le molecole dell'analita cariche migrano verso l'elettrodo con la carica opposta.
3. Migrazione: Le molecole dell'analita si muovono attraverso la soluzione tampone, creando un limite mobile che può essere osservato usando schlieren ottica . Questa tecnica utilizza rifrazione leggera per visualizzare il confine e misurarne il movimento.
4. Analisi: Il tasso di migrazione del confine è proporzionale alla mobilità elettroforetica dell'analita , che è determinato dalla sua carica e dimensioni. Queste informazioni possono essere utilizzate per identificare e quantificare componenti diversi nella miscela di analiti.
Caratteristiche chiave dell'elettroforesi di confine libera o mobile:
* Nessun mezzo di supporto: L'analita migra attraverso un tampone liquido, a differenza di altre tecniche di elettroforesi che utilizzano gel o membrane.
* Confine acuta: La presenza di un confine distinto consente una misurazione precisa della migrazione dell'analita.
* Analisi quantitativa: La tecnica è adatta all'analisi quantitativa di diversi componenti in una miscela.
* Risoluzione limitata: Rispetto ad altre tecniche di elettroforesi, l'elettroforesi del confine mobile ha una risoluzione limitata per la separazione di miscele complesse.
Applicazioni:
* Caratterizzazione proteica: Determinare la purezza e l'omogeneità delle soluzioni proteiche.
* Focus isoelettrico: Identificazione del punto isoelettrico delle proteine.
* Analisi delle proteine sieriche: Studiare la composizione delle proteine sieriche nelle applicazioni cliniche.
Limitazioni:
* Risoluzione limitata: Rispetto ad altre tecniche, ha una potenza di risoluzione inferiore per miscele complesse.
* Sfide tecniche: Richiede attrezzature specializzate e condizioni sperimentali precise.
* che richiede tempo: Il processo può richiedere relativamente tempo.
Tecniche moderne:
Mentre l'elettroforesi di confine libera o mobile è stata una svolta significativa ai suoi tempi, è stata ampiamente sostituita da tecniche di elettroforesi più sofisticate e versatili, come l'elettroforesi su gel e elettroforesi capillare . Queste tecniche offrono una risoluzione più elevata, un funzionamento più semplice e un'applicabilità più ampia.
Tuttavia, il significato storico dell'elettroforesi di confine libera o mobile rimane mentre ha spianato la strada allo sviluppo delle moderne tecniche di elettroforesi che sono ampiamente utilizzate in vari campi oggi.
