Le proteine pre-macchiate sono miscele di proteine che sono state collegate in modo covalente a una tintura . Ciò consente loro di essere visualizzati direttamente su un gel , eliminando la necessità di procedure di colorazione separate. Sono comunemente usati come marcatori di peso molecolare nell'elettroforesi in gel, in particolare SDS-PAGE (Elettroforesi su gel di dodecil solfato-poliacrilammide di sodio).
Ecco una rottura degli aspetti chiave:
1. Perché usare proteine pre-macchiate?
* comodità: Non è necessaria una colorazione separata, risparmiando tempo e fatica.
* Tracciamento visivo: Ti consente di tracciare l'avanzamento della separazione delle proteine durante l'elettroforesi.
* Determinazione delle dimensioni accurate: Fornisce punti di riferimento per determinare il peso molecolare delle proteine sconosciute.
* Risoluzione dei problemi: Può aiutare a identificare potenziali problemi nella configurazione dell'elettroforesi, come caricamento errato in gel o in esecuzione irregolare.
2. Come funzionano le proteine pre-macchiate:
* coniugazione della tintura: Le proteine sono collegate in modo covalente a un colorante, di solito un colorante fluorescente o colorato.
* Mobilità elettroforetica: Il colorante non altera significativamente la mobilità elettroforetica della proteina, il che significa che migrano in base al loro peso molecolare.
* Visualizzazione: Il colorante consente la visualizzazione diretta delle bande proteiche sul gel, sotto la luce UV o con luce visibile.
3. Caratteristiche chiave delle proteine pre-macchiate:
* Range di peso molecolare: Disponibile in varie gamme per soddisfare le diverse esigenze sperimentali.
* Proprietà coloranti: Il colorante utilizzato influisce sulla sensibilità e la visibilità delle bande.
* Stabilità: Alcune proteine pre-macchiate sono più stabili di altre e possono resistere a condizioni difficili.
* Compatibilità: Assicurati la compatibilità con il buffer di elettroforesi e il tipo di gel.
4. Applicazioni di proteine pre-macchiate:
* marcatori di peso molecolare SDS-PAGE: L'applicazione più comune.
* Western blotting: Usato come riferimento di dimensioni per le proteine trasferite.
* Monitoraggio della purificazione della proteina: Tracciare la migrazione delle proteine durante le procedure di purificazione.
* Risoluzione dei problemi dell'elettroforesi in gel: Aiuta a diagnosticare problemi come caricamento di gel irregolare.
5. Tipi di marcatori proteici pre-macchiati:
* Segnali arcobaleno: Contenere un mix di proteine con colori diversi per una facile identificazione di ciascuna banda.
* marcatori a colori singoli: Contenere un singolo colorante e fornire meno differenziazione visiva, ma può essere utile per applicazioni specifiche.
6. Vantaggi dell'utilizzo di proteine pre-macchiate:
* Flusso di lavoro semplificato: Elimina le fasi di colorazione separate, risparmiando tempo e sforzi.
* Tracciamento visivo: Consente il monitoraggio in tempo reale della separazione delle proteine durante l'elettroforesi.
* Determinazione delle dimensioni affidabili: Fornisce riferimenti accurati di peso molecolare.
* Aiuto per la risoluzione dei problemi: Aiuta a identificare potenziali problemi nella configurazione dell'elettroforesi.
7. Svantaggi dell'uso di proteine pre-macchiate:
* Costo: Può essere più costoso degli standard proteici tradizionali.
* Sensibilità: Potrebbe non essere sensibile come gli standard proteici tradizionali, specialmente per le proteine a bassa abbondanza.
* Interferenza colorante: Il colorante può interferire con alcune applicazioni a valle, come il sequenziamento delle proteine o la spettrometria di massa.
Nel complesso, le proteine pre-macchiate sono uno strumento conveniente e prezioso per i ricercatori che lavorano con l'elettroforesi su gel. Forniscono un modo semplice e affidabile per tracciare la migrazione delle proteine e determinare il peso molecolare. Tuttavia, è importante scegliere il marcatore appropriato per la tua applicazione specifica e considerare le potenziali limitazioni.
