1. FIXAZIONE:
* Questo è il primo e più critico passo.
* L'obiettivo è preservare la struttura dei tessuti e prevenire la decomposizione.
* I fissativi comuni includono formalina, glutaraldeide e alcol.
2. Disidratazione:
* L'acqua viene rimossa dal tessuto utilizzando una serie graduata di soluzioni alcoliche (di solito 70%, 90%, 95%e 100%).
* Questo prepara il tessuto per l'incorporamento nella cera di paraffina.
3. Clearing:
* L'alcol viene rimosso dal tessuto e sostituito con un solvente che è miscibile sia con alcol che con cera di paraffina (ad esempio xilene, toluene o istocleare).
4. Incorporamento:
* Il tessuto è infiltrato con cera di paraffina fusa sotto vuoto.
* Questo processo consente alla cera di permeare il tessuto e consolidare, creando un blocco fermo che può essere sezionato.
5. Sezione:
* Il blocco di paraffina viene tagliato e tagliato in sezioni sottili (in genere 4-10 micrometri di spessore) usando un microtomo.
6. Montaggio:
* Le sezioni sono accuratamente montate su vetrini, di solito con un adesivo idroefuso.
7. DeParaffinization:
* La cera di paraffina viene rimossa dalle sezioni tissutali usando una serie di solventi (ad es. Xilene, toluene).
8. Reidratazione:
* Le sezioni tissutali vengono reidratate attraverso una serie graduata di soluzioni alcoliche (ad es. 100%, 95%, 90%, 70%e acqua).
9. Colorazione:
* È qui che vengono visualizzati i componenti dei tessuti.
* Ci sono numerose macchie, ognuna con le sue proprietà e applicazioni.
* Esempi includono ematossilina ed eosina (H&E) per morfologia generale e macchie speciali per tipi o strutture di cellule specifiche.
10. Montaggio:
* Le sezioni colorate sono montate con un vetrino e un mezzo di montaggio (ad es. DPX, Permount).
11. Etichettatura:
* Le diapositive sono etichettate con informazioni pertinenti (nome del paziente, data, tipo di tessuto, macchia).
Nota: Questo è un protocollo standard. Potrebbero esserci variazioni a seconda del tipo di tessuto specifico, delle tecniche di colorazione e delle applicazioni di ricerca.
