1. Isolando il gene dell'insulina umana:
* Identificazione del gene: I ricercatori hanno dovuto prima individuare l'esatta sequenza del DNA che codifica per l'insulina umana. Ciò ha comportato lo studio del genoma umano e la comprensione della struttura della proteina dell'insulina.
* Cloning the Gene: Una volta identificato il gene, hanno usato tecniche come enzimi di restrizione e plasmidi per eliminare il gene dell'insulina dal DNA umano e inserirlo in un piccolo pezzo circolare di DNA chiamato plasmide. Ciò ha creato una molecola di DNA ricombinante.
2. Scegliere un ospite batterico adatto:
* e. coli come cavallo di battaglia: Il batterio * Escherichia coli * (E. coli) è stato scelto come organismo ospite. È un batterio ben studiato, facilmente manipolato e in rapida riproduzione, rendendolo ideale per la produzione su larga scala.
3. Inserimento del gene in batteri:
* Trasformazione: Il plasmide ricombinante contenente il gene dell'insulina umana è stato introdotto nelle cellule di E. coli. Questo processo, chiamato trasformazione, prevedeva la creazione di condizioni in cui i batteri occuperebbero il plasmide.
4. Selezione per i batteri transgenici:
* Resistenza agli antibiotici: Il plasmide conteneva spesso un gene per la resistenza agli antibiotici. Ciò ha permesso ai ricercatori di identificare facilmente i batteri che avevano ripreso con successo il plasmide. Avrebbero coltivato i batteri in presenza dell'antibiotico e solo quei batteri con il plasmide sarebbero sopravvissuti.
5. Esprimere il gene dell'insulina:
* Promotori e regolamentazione: Il plasmide è stato progettato in modo tale che il gene dell'insulina umana fosse espresso (acceso) all'interno dell'E. coli. Ciò ha comportato una sequenza di promotori:una regione di DNA che dice ai macchinari batterici di iniziare a leggere e trascrivere il gene dell'insulina.
6. Produzione e purificazione dell'insulina:
* Fermentazione su larga scala: I batteri transgenici di E. coli sono stati coltivati in grandi serbatoi di fermentazione, consentendo loro di produrre grandi quantità di insulina.
* Purificazione: Dopo la fermentazione, l'insulina prodotta dai batteri doveva essere purificata dal resto dei componenti batterici. Ciò ha comportato varie tecniche come la cromatografia e la filtrazione.
Nota importante: Questa è una panoramica semplificata. Il processo ha comportato numerosi dettagli tecnici, iterazioni e sfide e molti brillanti scienziati hanno contribuito al suo successo.
