1. Tagliare il DNA in siti specifici:
* Gli enzimi di restrizione riconoscono e tagliano il DNA in sequenze specifiche chiamate siti di restrizione . Questi siti sono in genere 4-8 coppie di basi lunghe e sono palindromiche (leggi lo stesso avanti e indietro).
* Ogni enzima ha un sito di riconoscimento unico, che consente un targeting preciso di sequenze di DNA specifiche.
* Quando un enzima di restrizione taglia il DNA, spesso lascia estremità appiccicose , che sono sporgenze corte a singolo filamento. Queste estremità appiccicose sono complementari tra loro e possono basare con altre estremità appiccicose generate dallo stesso enzima.
2. Unendo i frammenti di DNA:
* Dopo che il DNA è stato tagliato da un enzima di restrizione, diversi frammenti possono essere uniti usando DNA ligasi .
* La ligasi del DNA sigilla gli spazi vuoti della spina dorsale del DNA, creando una nuova molecola di DNA ricombinante.
* Le estremità appiccicose facilitano il processo di giunzione, poiché si allineano naturalmente e la coppia di base, tenendo uniti i frammenti fino a quando la ligasi non può sigillare il legame.
3. Applicazioni nella ricombinazione del DNA:
* Clonazione: Gli enzimi di restrizione sono essenziali per creare molecole di DNA ricombinante che possono essere inserite nei vettori (come i plasmidi) per la clonazione e l'espressione.
* Modifica genica: Gli enzimi di restrizione sono usati per tagliare regioni specifiche del DNA, consentendo l'inserimento di nuovi geni o la correzione di difetti genetici.
* Ingegneria genetica: Gli enzimi di restrizione sono strumenti cruciali nell'ingegneria genetica per la creazione di organismi geneticamente modificati (OGM) con i tratti desiderati.
In sintesi, gli enzimi di restrizione agiscono come forbici molecolari altamente specifiche, tagliando il DNA in siti specifici. Questo taglio preciso, spesso generando estremità appiccicose, consente l'adesione a diversi frammenti di DNA, portando alla creazione di molecole ricombinanti del DNA.
