tecniche per osservare le giunzioni cellulari
* Microscopia leggera:
* Microscopia a campo luminoso: Sebbene non la microscopia a campo luminoso più dettagliato può fornire una vista di base della forma cellulare e di come sono collegate le cellule.
* Microscopia a contrasto di fase: Questa tecnica migliora il contrasto all'interno della cella, rendendo più facile vedere i contorni delle giunzioni cellulari.
* Microscopia del contrasto di interferenza differenziale (DIC): DIC produce un'immagine tridimensionale, quasi olografica, migliorando la visualizzazione delle giunzioni cellulari.
* Microscopia elettronica (EM): Per i dettagli ultrastrutturali:
* Microscopia elettronica a trasmissione (TEM): TEM fornisce immagini incredibilmente ad alta risoluzione. Sezioni sottili di cellule sono colorate con metalli pesanti e gli elettroni che passano attraverso rivelano l'architettura dettagliata delle giunzioni cellulari.
* Microscopia elettronica a scansione (SEM): SEM crea un'immagine 3D della superficie della cellula, che mostra la morfologia delle giunzioni cellulari in modo più dettagliato.
Preparazioni specifiche per lo studio delle giunzioni cellulari:
* Cultura cellulare: Gli scienziati usano spesso cellule coltivate (cresciute in un laboratorio) per studiare le giunzioni cellulari. Le cellule in coltura sono più facili da manipolare e osservare rispetto alle cellule nei tessuti.
* Preparazione del tessuto:
* FIXATION: Le cellule e i tessuti sono trattati chimicamente (fissi) per preservare la loro struttura e prevenire il degrado.
* Incorporamento: Il tessuto fisso è incorporato in un mezzo solido come cera o resina per il supporto durante il sezionamento.
* Sezione: Le fette sottili del tessuto incorporato vengono tagliate usando un microtomo, creando sezioni abbastanza sottili per la microscopia di luce o elettronica.
* colorazione: I coloranti e le macchie specifiche vengono utilizzati per evidenziare diverse strutture e componenti cellulari, rendendo più visibili giunzioni cellulari.
tipi di giunzioni cellulari da osservare:
* giunzioni strette: Queste giunzioni formano un sigillo stretto tra le cellule, impedendo il passaggio di fluidi e molecole tra di loro.
* Junctions adherens: Queste giunzioni forniscono una forte adesione tra le cellule, che agiscono come una "colla". Coinvolgono proteine come caderine che legano le cellule insieme.
* Desmosomi: Simile alle giunzioni aderenti, i desmosomi forniscono una forte adesione, ma sono strutture simili a spot che collegano i filamenti intermedi delle cellule adiacenti.
* Gap Junctions: Queste giunzioni fungono da canali che consentono la comunicazione diretta tra cellule, ioni di passaggio e piccole molecole.
Considerazioni importanti:
* Specificità: Gli scienziati potrebbero usare anticorpi che si legano specificamente alle proteine presenti nelle giunzioni cellulari. Ciò consente la colorazione mirata e la visualizzazione di tipi specifici di giunzioni.
* Preparazione del campione: Una corretta preparazione delle cellule o dei tessuti è fondamentale per garantire l'integrità delle giunzioni cellulari e ottenere immagini di alta qualità.
Esempio di esperimento:
Uno scienziato vuole studiare come le giunzioni strette nel rivestimento intestinale sono influenzate da un farmaco specifico. Potrebbero:
1. Crescere le cellule epiteliali intestinali in coltura.
2. Tratta alcune cellule con il farmaco e altre con una soluzione di controllo.
3. Correggi e preparare le celle per la microscopia elettronica.
4. Analizzare le immagini per confrontare la struttura delle giunzioni strette nelle cellule trattate e non trattate.
Combinando tecniche e analisi appropriate, gli scienziati possono ottenere preziose informazioni sulla struttura e sulla funzione delle giunzioni cellulari, essenziali per l'organizzazione e la comunicazione dei tessuti.
