1. Inibizione delle DNasi :Il sangue contiene vari enzimi, comprese le nucleasi, che possono degradare il DNA se non adeguatamente inibiti. Il perclorato di sodio agisce come un inibitore delle DNasi, in particolare di quelle che richiedono magnesio o calcio per la loro attività. Si lega a questi ioni metallici, impedendo loro di partecipare alle reazioni catalizzate dagli enzimi e proteggendo il DNA dalla degradazione.
2. Precipitazione delle proteine :Il perclorato di sodio viene comunemente utilizzato durante la fase di precipitazione delle proteine nell'isolamento del DNA. Viene aggiunto a un lisato o sospensione cellulare per indurre la precipitazione delle proteine, inclusa l'emoglobina, che è abbondante nei globuli rossi. L'elevata concentrazione di sale creata dal perclorato di sodio interrompe la solubilità delle proteine, facendole aggregare e formare un pellet durante la centrifugazione. Ciò consente la separazione del surnatante contenente il DNA dalle proteine precipitate.
3. Precipitazione degli acidi nucleici :Il perclorato di sodio può anche essere impiegato per precipitare gli acidi nucleici, compreso il DNA genomico, dal surnatante ottenuto dopo la precipitazione delle proteine. Raggiunge questo obiettivo riducendo la solubilità delle molecole di DNA. Quando etanolo o isopropanolo vengono aggiunti al surnatante insieme al perclorato di sodio, il DNA diventa insolubile e forma un precipitato visibile. Questo precipitato può essere raccolto mediante centrifugazione e ulteriormente purificato per ottenere DNA genomico puro.
4. Rimozione di contaminanti :Il perclorato di sodio aiuta a rimuovere contaminanti come proteine, altre macromolecole e sali dalla preparazione del DNA. L'elevata concentrazione di sale ottenuta con il perclorato di sodio aiuta nella precipitazione efficiente delle impurità, lasciando dietro di sé DNA purificato.
5. Ottimizzazione della resa e della qualità del DNA :L'uso del perclorato di sodio nell'isolamento del DNA genomico può ottimizzare sia la resa che la qualità del DNA estratto. Inibendo efficacemente le DNasi, previene la degradazione del DNA, garantendo l'integrità e l'elevato peso molecolare del DNA isolato. Inoltre, l'efficiente rimozione dei contaminanti migliora la purezza complessiva della preparazione del DNA, rendendola adatta a varie applicazioni di biologia molecolare a valle.
Nel complesso, il perclorato di sodio svolge un ruolo vitale nell'isolamento del DNA genomico dal sangue umano inibendo le DNasi, facilitando la precipitazione delle proteine e degli acidi nucleici, rimuovendo i contaminanti e migliorando la qualità e la resa del DNA isolato.
