1. Estrarre il gene di interesse
* Enzimi di restrizione: Questi enzimi si comportano come forbici molecolari, riconoscendo specifiche sequenze di DNA e tagliando la molecola di DNA in quei siti. Questo crea frammenti contenenti il gene desiderato.
* Vettori: Queste sono molecole di DNA che fungono da portatori per il gene di interesse. I tipi comuni includono plasmidi (piccole molecole di DNA circolare presenti nei batteri) e vettori virali (virus modificati utilizzati per fornire materiale genetico).
* enzimi ligasi: Questi enzimi si comportano come una colla molecolare, che unisce il gene di interesse nel vettore.
2. Ricombinare il DNA
* DNA ligasi: Come accennato in precedenza, questo enzima è cruciale per unirsi al gene di interesse nel vettore. Sigilla gli spazi tra i frammenti di DNA, creando una molecola di DNA ricombinante stabile.
abbattiamo il processo:
1. Isolamento del DNA: Il DNA contenente il gene di interesse viene estratto dalla sua fonte (ad esempio una cellula vegetale, animale o batterica).
2. Tagliare il DNA: Il DNA viene trattato con enzimi di restrizione specifici che tagliano a sequenze precise, generando frammenti contenenti il gene target.
3. Preparazione del vettore: Il vettore scelto (plasmide o virale) viene anche tagliato con lo stesso enzima di restrizione, creando un sito compatibile per inserire il gene.
4. Unendo il gene e il vettore: Il frammento genico e il vettore aperto sono miscelati insieme. La ligasi del DNA si unisce alle estremità del gene e del vettore, creando una molecola di DNA ricombinante.
5. Trasformazione/trasfezione: La molecola di DNA ricombinante viene introdotta in una cellula ospite (ad esempio batteri). Questo processo è chiamato trasformazione (per batteri) o trasfezione (per cellule eucariotiche).
6. Selezione e replica: Le cellule ospiti contenenti il DNA ricombinante sono selezionate e lasciate moltiplicare, producendo molte copie del gene di interesse.
Nota importante: Questo processo è fondamentale per l'ingegneria genetica e la biotecnologia, permettendoci di creare organismi con nuovi tratti o produrre proteine preziose per applicazioni mediche e industriali.
