1. Analisi dei frammenti di DNA:
* Digestione degli enzimi di restrizione: Durante la clonazione, si utilizzano enzimi di restrizione per tagliare il DNA di interesse e il vettore (plasmide) a sequenze specifiche. Ciò genera frammenti di DNA di varie dimensioni.
* Elettroforesi in gel: I frammenti di DNA vengono quindi separati in base alle loro dimensioni usando l'elettroforesi su gel. Viene utilizzata una matrice in gel (di solito agarosio) e viene applicata una corrente elettrica. Frammenti più piccoli viaggiano più velocemente e più lontano attraverso il gel rispetto ai frammenti più grandi.
* Visualizzazione: I frammenti di DNA vengono visualizzati usando un colorante che si lega al DNA e alle fluorescenti sotto la luce UV. Ciò ti consente di vedere le diverse bande di DNA sul gel, che rappresentano le diverse dimensioni dei frammenti di DNA.
2. Usi in clonazione:
* Verifica del digest di restrizione: L'elettroforesi aiuta a garantire che gli enzimi di restrizione abbiano tagliato con successo il DNA nei siti corretti e che il vettore abbia i siti di restrizione corretti per la legatura.
* Analizzare i cloni: Dopo la legatura (unendo l'inserto del DNA con il vettore), l'elettroforesi viene utilizzata per verificare che la legatura abbia avuto successo. È possibile confrontare le dimensioni della molecola di DNA ricombinante con il frammento e il vettore del DNA originali.
* Librerie di screening: L'elettroforesi può essere utilizzata per analizzare gli inserti del DNA in una libreria di cloni, aiutando a identificare i cloni con l'inserto desiderato.
In sintesi: L'elettroforesi non fa parte del processo di clonazione centrale stessa, ma è uno strumento analitico essenziale per verificare i diversi passaggi e garantire che l'esperimento di clonazione abbia successo.
